Topmusicanswers
- Kāpēc PCR nav pastiprinājuma??
- Kāpēc mana DNS nepalielinājās??
- Kas notiek, ja PCR netiek pievienoti primeri?
- Kā noteikt nespecifisko pastiprinājumu PCR?
Kāpēc PCR nav pastiprinājuma??
Nepietiekams pastiprinājums var rasties, ja sākotnējais veidnes daudzums ir pārāk mazs. Palieliniet pastiprināšanas ciklu skaitu ar 5 soļiem vai, ja iespējams, palieliniet veidnes daudzumu. Piesārņotāji dNTP maisījumā var izraisīt nepilnīgu vai nepareizu amplifikāciju vai PCR inhibīciju. Izmantojiet augstas kvalitātes dNTP.
Kāpēc mana DNS nepalielinājās??
1) jums var būt slikts gruntējuma dizains vai reakcijas standartizācija (Tātad, novērtējiet savu gruntējuma dizainu un, kā jau citi teica, veiciet gradienta PCR, lai novērtētu dažādus atkvēlināšanas tempus); 2) Nav DNS (iespējams, jūsu ekstrakcijas protokols nav izdevies), un tāpēc jūsu primeri var tikai atkausēt viens otru (vai tos nojaukt).
Kas notiek, ja PCR netiek pievienoti primeri?
Jautājums: ja esat aizmirsis pievienot primerus savai PCR reakcijai, kas notiktu un kāpēc? 1. Jūsu reakcija neizdosies, jo Taq polimerāze nevar pievienot bāzes bez neliela DNS gabala. ... Jūsu reakcija neizdosies, jo nebūtu fermentu, kas varētu pievienot jaunas nukleotīdu bāzes.
Kā noteikt nespecifisko pastiprinājumu PCR?
Izmantojiet mazāk ciklu, ja veidnes koncentrācija ir augsta, un izmantojiet vairāk ciklu, ja veidnes koncentrācija ir zema. 2. Pagarinājuma laiks bija pārāk garš: pārmērīgs pagarinājuma laiks var atļaut nespecifisku pastiprināšanu. Parasti izmantojiet pagarinājuma laiku 1 min/kb.
