Topmusicanswers
Pielāgojiet atlaidināšanas temperatūru, jo augsta PCR piedevu vai līdzšķīdinātāju koncentrācija vājina primeru saistīšanos ar mērķi. Palieliniet DNS polimerāzes daudzumu vai izmantojiet DNS polimerāzes ar augstu apstrādes spēju.
...
- Secības kļūdas PCR produktu galos.
- Kļūdaini pozitīvs pastiprinājums.
- Resursi.
- Kādas ir kopējās problēmu novēršanas metodes, kas var rasties PCR?
- Kāpēc mans PCR nedarbojas??
- Kas izraisa PCR smērēšanu?
- Kas notiek, ja atlaidināšanas temperatūra ir pārāk augsta?
Kādas ir kopējās problēmu novēršanas metodes, kas var rasties PCR?
PCR problēmu novēršanas rokasgrāmata
| Problēma | Cēloņi |
|---|---|
| Zema PCR produkta raža vai tās nav | Thermocycler programmas atlaidināšana un pagarināšanas temperatūra nav optimāla |
| Reakcijai trūkst Taq polimerāzes vai citas reakcijas sastāvdaļas | |
| Gruntējuma koncentrācija ir pārāk zema | |
| Mērķa secība nav DNS veidnē |
Kāpēc mans PCR nedarbojas??
Aizmirstot tikai vienu PCR reakcijas sastāvdaļu, neatkarīgi no tā, vai tā ir DNS polimerāze, praimeri vai pat veidnes DNS, reakcija būs neveiksmīga. Vienkāršākais risinājums ir atkārtot reakciju. ... Ja pēc tam joprojām nav PCR produkta, iespējams, ka kaut kas cits kavē jūsu reakciju.
Kas izraisa PCR smērēšanu?
DNS piesārņojums, RNS DNS paraugā, augsta DNS koncentrācija PCR reakcijā var izraisīt smērēšanos. ... DNS uztriepes parasti rodas augos, pateicoties augstajai šablona DNS koncentrācijai.
Kas notiek, ja atlaidināšanas temperatūra ir pārāk augsta?
Rūdīšanas temperatūra bija pārāk augsta
Ja atlaidināšanas temperatūra ir pārāk augsta, praimeri nespēj saistīties ar veidni. Īkšķa noteikums ir izmantot atlaidināšanas temperatūru, kas ir par 5 ° C zemāka nekā Tm no grunts.
