Takara pcr problēmu novēršana

Tā vietā būs jāoptimizē PCR nosacījumi; Pielāgojot PCR nosacījumus, ņemiet vērā sekojošo:

1. Samaziniet veidnes daudzumu.
2. Palieliniet atkausēšanas temperatūru.
3. Izmantojiet pieskāriena PCR.
4. Samaziniet PCR ciklu skaitu.
5. Pārveidojiet gruntskrāsas.
6. Izmantojiet ligzdotus praimerus.
7. Atkārtoti pastipriniet produktu.

1. Kāpēc mans PCR nedarbojas??
2. Kā optimizēt PCR apstākļus??
3. Kas izraisa smērēšanos PCR?
4. Kā zināt, vai PCR ir inficēts??

Kāpēc mans PCR nedarbojas??

Aizmirstot tikai vienu PCR reakcijas sastāvdaļu, neatkarīgi no tā, vai tā ir DNS polimerāze, praimeri vai pat veidnes DNS, reakcija būs neveiksmīga. Vienkāršākais risinājums ir atkārtot reakciju. ... Ja pēc tam joprojām nav PCR produkta, iespējams, ka kaut kas cits kavē jūsu reakciju.

Kā optimizēt PCR apstākļus??

PCR apstākļi

1. Izmantojiet augstāku denaturācijas temperatūru (piem.g., 98 ° C pretstatā 94 ° C vai 95 ° C), lai veidne pilnībā denaturētos.
2. Saglabājiet pēc iespējas īsāku ar GC bagātu veidņu atlaidināšanas laiku.
3. Izmantojiet primerus ar augstāku T_m (>68 ° C), jo atlaidināšana var notikt augstākā temperatūrā.

Kas izraisa smērēšanos PCR?

DNS piesārņojums, RNS DNS paraugā, augsta DNS koncentrācija PCR reakcijā var izraisīt smērēšanos. ... DNS uztriepes parasti rodas augos, pateicoties augstajai šablona DNS koncentrācijai.

Kā zināt, vai PCR ir inficēts??

Lai pārbaudītu šķīduma piesārņojumu, apkopojiet negatīvās kontroles reakcijas, izmantojot jaunus reaģentus, par kuriem zināms, ka tie nav piesārņoti, un katrai reakcijai pievienojiet vienu no aizdomīgajiem šķīdumiem. Šī reakcija parāda, ka pastiprināti produkti, kas norāda uz piesārņojumu, ir pierādījums tam, ka pievienotais šķīdums bija piesārņots.